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常見培養(yǎng)基的配方與配置方法
發(fā)布時(shí)間:2020-04-23 來源:后臺(tái)管理員瀏覽:2994 次

一、糖發(fā)酵管

成分:

牛肉膏

5g

蛋白胨

10g

氯化鈉

3g

磷酸氫二鈉

2g

0.2%滇麝香草酚藍(lán)溶液

12mL

蒸餾水

1000mL

PH = 7.4

制法:

1. 葡萄糖發(fā)酵管按上述成分配好后,按0.5%加入葡萄糖,分裝于有一個(gè)倒置小管的小試管內(nèi),121℃高壓滅菌15min。

2. 其他各種糖發(fā)酵管可按上述成分配好后,分裝每瓶1000 mL,121℃高壓滅菌15min。另將各種糖類分別配好10%溶液,同時(shí)高壓滅菌。將5mL糖溶液加入于100 mL培養(yǎng)基內(nèi),以無(wú)菌操作分裝小試管。

注:蔗糖不純,加熱后會(huì)自行水解者,應(yīng)采用過濾法除菌。

試驗(yàn)方法:從瓊脂斜面上挑取小量培養(yǎng)物接種,于36℃±1℃培養(yǎng),一般觀察2~3d。遲緩反應(yīng)需觀察14~30d。

二、乳糖膽鹽發(fā)酵管

成分:

蛋白胨

20g

豬膽鹽(或牛、羊膽鹽)

5g

乳糖

10g

0.04%滇甲酚紫水溶液

25mL

蒸餾水

1000mL

制法:

將蛋白胨,膽鹽及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示劑,分裝每管10 mL,并放入一個(gè)小倒管,115℃高壓滅菌15min。

注:雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管除蒸餾水外,其他成分加倍。

三、5%乳糖發(fā)酵管

成分:

蛋白胨

0.2g

氯化鈉

0.5g

乳糖

5g

2%溴麝香草酚藍(lán)水溶液

1.2mL

蒸餾水

100mL

pH = 7.4

制法:

除乳糖以外的各成分:溶解于50mL蒸餾水內(nèi),校正pH。將乳糖溶解于另外50mL蒸餾水內(nèi),分別滅菌121 ℃ 15min,將兩液混合,以無(wú)菌操作分裝于滅菌小試管內(nèi)。

注:在此培養(yǎng)基內(nèi),大部分乳糖遲緩發(fā)酵的細(xì)菌可于ld內(nèi)發(fā)酵。

四、緩沖葡萄糖蛋白胨水(MR和VP試驗(yàn)用)

成分:

磷酸氫二鉀

5g

多胨

7g

葡萄糖

5g

蒸餾水

1000mL

制法:

溶化后校正pH,分裝試管,每管1mL,121℃高壓滅菌15min。

甲基紅(MR)試驗(yàn):

自瓊脂斜面挑取少量培養(yǎng)物接種本培養(yǎng)基中,于36±1℃培養(yǎng)2~5d,哈夫尼亞菌則應(yīng)在22~25℃培養(yǎng)。滴加甲基紅試劑一滴,立即觀察結(jié)果。鮮紅色為陽(yáng)性,黃色為陰性,甲基紅試劑配法:10mg甲基紅溶于30mL95%乙醇中,然后加入20 mL蒸餾水。

V-P試驗(yàn):

用瓊脂培養(yǎng)物接種本培養(yǎng)基中,于36±1℃培養(yǎng)2~4d。哈夫尼亞菌則應(yīng)在22~25℃培養(yǎng)。加入6%α-萘酚-乙醇溶液0.5mL和40%氫氧化鉀溶液0.2mL充分振搖試管,觀察結(jié)果陽(yáng)性反應(yīng)立刻或于數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)紅色,如為陰性,應(yīng)放在36±1℃下培養(yǎng)4h再進(jìn)行觀察。

五、營(yíng)養(yǎng)明膠

成分:

蛋白胨

5g

牛肉膏

3g

明膠

120g

蒸餾水

1000mL

pH = 6.8~7.0

制法:

加熱溶解,校正至pH7.4~7.6,分裝小管,121℃高壓滅菌10min,取出后迅速冷卻,使其凝固,復(fù)查終pH應(yīng)為6.8~7.0。

試驗(yàn)方法:用瓊脂培養(yǎng)物穿刺接種,放在22~25℃培養(yǎng),每天觀察結(jié)果,記錄液化時(shí)間。或放在36士1℃培養(yǎng),每天取出,放冰箱內(nèi)30min后再觀察結(jié)果。

六、苯丙氨酸培養(yǎng)基

成分:

酵母浸膏

3g

DI-苯丙氨酸(L-苯丙氨酸)

2g(1g)

磷酸氫二鈉

1g

氯化鈉

5g

瓊脂

12g

蒸餾水

1000mL

制法:

加熱溶解后分裝試管,121℃高壓滅菌15min,使成斜面。

試驗(yàn)方法:

自瓊脂斜面上挑取大量培養(yǎng)物,移種于苯丙氨酸瓊脂,在36士1℃培養(yǎng)4h或18~24h,滴加10%三氯化鐵溶液2~3滴,自斜面培養(yǎng)物上 流下,苯丙氨酸脫氨酶陽(yáng)性者呈深綠色。

七、蛋白胨水(靛基質(zhì)試驗(yàn)用)

成分:

蛋白胨(或胰蛋白胨)

20g

氯化鈉

5g

蒸餾水

1000mL

pH = 7.4

制法:

按上述成分配制,分裝小試管,121℃高壓滅菌15min。

靛基質(zhì)試劑

① 柯凡克試劑:將5g對(duì)二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中,然后緩慢加入濃鹽酸25ml。

② 歐-波試劑:將1g對(duì)二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇內(nèi),然后緩慢加入濃鹽酸20 ml。試驗(yàn)方法:挑取小量培養(yǎng)物接種,在36士1℃培養(yǎng)1~2d,必要時(shí)可培養(yǎng)4~5d。加入柯凡克試劑約0.5mL,輕搖試管,陽(yáng)性者于試劑層呈深紅色;或加入歐-波試劑約0.5 mL,沿管壁流下,覆蓋于培養(yǎng)液表面,陽(yáng)性者于液面接觸處呈玫瑰紅色。

注:蛋白胨中應(yīng)含有豐富的色氨酸。每批蛋白胨買來后,應(yīng)先用已知菌種鑒定后方可使用。

八、硫酸亞鐵瓊脂(硫化氫試驗(yàn)用)

成分:

牛肉膏

3g

酵母浸膏

3g

蛋白胨

10g

硫酸亞鐵

0.2g

硫代硫酸鈉

0.3g

氯化鈉

5g

瓊脂

12g

蒸餾水

1000ml

制法:

加熱溶解,校正pH,分裝試管,115℃高壓滅菌15min,取出直立候其凝固。

試驗(yàn)方法:

挑取瓊脂培養(yǎng)物,沿管壁穿刺,于36士1℃培養(yǎng)1~2d,觀察結(jié)果。產(chǎn)硫化氫者使培養(yǎng)基變?yōu)楹谏?/p>

注:腸桿菌科細(xì)菌測(cè)定硫化氫的產(chǎn)生,應(yīng)采用三糖鐵瓊脂或本培養(yǎng)基。

九、尿素瓊脂

成分:

蛋白胨

1g

氯化鈉

5g

葡萄糖

1g

磷酸二氫鉀

2g

4%酚紅溶液

3ml

瓊脂

20g

蒸餾水

1000ml

20%尿素溶液

100mL

制法:

將除尿素和瓊脂以外的成分配好,并校正pH,加入瓊脂,加熱溶化并分裝燒瓶。121℃高壓滅菌15min。冷至50~55℃,加入經(jīng)除菌過濾的尿素溶液,尿素的終濃度為2%,終pH應(yīng)為7.2±0.1.分裝于滅菌試管內(nèi),放成斜面?zhèn)溆谩?/p>

試驗(yàn)方法:

挑取瓊脂培養(yǎng)物接種,在36士1℃培養(yǎng)24h,觀察結(jié)果。尿素酶陽(yáng)性者由于產(chǎn)堿而使培養(yǎng)基變?yōu)榧t色。

十、氰化鉀(KCN)培養(yǎng)基

成分:

蛋白胨

10g

氯化鈉

5g

磷酸二氫鉀

0.225g

磷酸氫二鈉

5.64g

蒸餾水

1000ml

0.5%氰化鉀溶液

20ml

pH = 7.6

制法:

將除氰化鉀以外的成分配好后分裝燒瓶,121℃高壓滅菌15min。放在冰箱內(nèi)使其充分冷卻。每100 mL培養(yǎng)基加入0.5%氰化鉀溶液2.0mL(濃度為1:10000),分裝于12mm×100mm滅菌試管,每管約4mL,立刻用滅菌橡皮塞塞緊,放在4℃冰箱內(nèi),至少可保存兩個(gè)月。同時(shí),將不加氰化鉀的培養(yǎng)基作為對(duì)照培養(yǎng)基,分裝試管備用。

十一、營(yíng)養(yǎng)瓊脂

成分:

蛋白胨

10g

牛肉膏

3g

氯化鈉

5g

瓊脂

15~20g

蒸餾水

1000mL

制法:

將除瓊脂以外的各成分溶解于蒸餾水內(nèi),加入15%氫氧化鈉溶液約2mL,校正pH至7.2~7.4。加入瓊脂,加熱煮沸,使瓊脂溶化分裝燒瓶,121℃高壓滅菌15min。

注:此培養(yǎng)基可供一般細(xì)菌培養(yǎng)之用,可傾注平板或制成斜面。如用于菌落計(jì)數(shù),瓊脂量為1.5%;如作成平板或斜面,則應(yīng)為2%。

十二、營(yíng)養(yǎng)肉湯

成分:

蛋白胨

10g

牛肉膏

3g

氯化鈉

5g

蒸餾水

1000mL

pH = 7.4

制法:

按上述成分混合,溶解后校正pH,分裝燒瓶,每瓶225 mL ,121℃高壓滅菌15min。

十三、緩沖蛋白胨水(BP)

成分:

蛋白胨

10g

氯化鈉

5g

磷酸氫二鈉

9g

磷酸二氫鉀

1.5g

蒸餾水

1000mL

pH = 7.2

制法:

按上述成分配好后以大燒瓶裝,121℃高壓滅菌15min。臨用時(shí)無(wú)菌分裝每瓶225mL。

注:本培養(yǎng)基供沙門氏菌前增菌用。

十四、EC肉湯

成分:

胰蛋白胨

20g

3號(hào)膽鹽(或混合膽鹽)

1.5g

乳糖

5g

磷酸氫二鉀

4g

磷酸二氫鉀

1.5g

氯化鈉

5g

蒸餾水

1000mL

制法:

將上述成分混合,溶解后,分裝有發(fā)酵倒管的試管中,121℃高壓滅菌15min。終pH為6.9±0.2。

十五、四硫磺酸鈉煌綠增菌液(TTB)

基礎(chǔ)培養(yǎng)基

多胨或眎胨

5g

膽鹽

1g

碳酸鈣

10g

硫代硫酸鈉

3g

蒸餾水

1000mL

基礎(chǔ)培養(yǎng)基

碘溶液

6g

碘化鉀

5g

蒸餾水

20ml

制法:

將基礎(chǔ)培養(yǎng)基的各成分加入蒸餾水中,加熱溶解,分裝每瓶100mL。分裝時(shí)應(yīng)隨時(shí)振搖,使其中的碳酸鈣混勻,121℃高壓滅菌15min備用。臨用時(shí)每100mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入碘溶液2mL,0.1%煌綠溶液1mL。

十六、亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC)

成分:

蛋白胨

5g

乳糖

4g

亞硒酸氫鈉

4g

磷酸氫二鈉

5.5g

磷酸二氫鉀

4.5g

L-胱氨酸

0.01g

蒸餾水

1000mL

1% L-胱氨酸-氫氧化鈉溶液的配法:稱取L-胱氨酸0.1g或(DL-胱氨酸0.2g),加1mol/L氫氧化鈉1.5mL,使溶解,再加入蒸餾水8.5mL即成。

制法:

將除亞硒酸氫鈉和L-胱氨酸以外的各成分溶解于900mL蒸餾水中,加熱煮沸,候冷備用。另將亞硒酸氫鈉溶解于100mL蒸餾水中,加熱煮沸,候冷,以無(wú)菌操作與上液混合。再加入1% L-胱氨酸-氫氧化鈉溶液1mL。

分裝于滅菌瓶中.每瓶100mL,pH應(yīng)為7.0±0.1。

十七、亞硫酸鉍瓊脂(BS)

成分:

蛋白胨

10g

牛肉膏

5g

葡萄糖

5g

硫酸亞鐵

0.3g

磷酸氫二鈉

4g

煌綠

0.025g

檸檬酸鉍銨

2g

亞硫酸鈉

6g

瓊脂

18~20g

蒸餾水

1000mL

pH = 7.5

制法:

1、將前面5種成分溶解于300mL蒸餾水中。

2、將檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉另用50mL蒸餾水溶解。

3、將瓊脂于600mL蒸餾水中煮沸溶解,冷至80℃。

4、將以上三液合并,補(bǔ)充蒸餾水至1000mL,校正pH,加0.5%煌綠水溶液5mL,搖勻,冷至50~55℃,傾注平皿。

注:此培養(yǎng)基不需高壓滅菌。制備過程不宜過分加熱,以免降低其選擇性。應(yīng)在臨用前一天制備,貯存于室溫暗處,超過48h不宜使用。

十八、三糖鐵瓊脂(TSI)

成分:

蛋白胨

20g

牛肉膏

5g

乳糖

10g

蔗糖

10g

葡萄糖

1g

氯化鈉

5g

硫酸亞鐵銨

0.2g

硫代硫酸鈉

0.2g

瓊脂

12g

酚紅

0.025g

蒸餾水

1000ml

pH = 7.4 

制法:

將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中,校正pH,加入瓊脂,加熱煮沸,以溶化瓊脂。加入0.2%酚紅水溶液12.5 mL,搖勻,分裝試管。裝量宜多些,以便得到較高的底層。121℃高壓滅菌15min,放置高層斜面?zhèn)溆谩?/p>

十九、三糖鐵瓊脂換用方法

成分:

蛋白胨

15g

眎胨

5g

牛肉膏

3g

酵母膏

3g

乳糖

10g

蔗糖

10g

葡萄糖

1g

氯化鈉

5g

硫酸亞鐵

0.2g

硫代硫酸鈉

0.3g

瓊脂

12g

酚紅

0.025g

蒸餾水

1000ml

pH = 7.4

制法:

將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中,校正pH,加入瓊脂,加熱煮沸,以溶化瓊脂。加入0.2%酚紅水溶液12.5 mL,搖勻,分裝試管,裝量宜多些,以便得到較高的底層。121℃高壓滅菌15min,放置高層斜面?zhèn)溆谩?/p>

二十、嗜鹽性試驗(yàn)培養(yǎng)基

成分:

蛋白胨

2g

氯化鈉

按不同量加

蒸餾水

100ml

pH = 7.7

制法:

配制2%蛋白胨水,校正pH,共配制5瓶,每瓶100mL。每瓶分別加入不同量的氯化鈉:(1)不加;(2)3g;(3)7g;(4)9g;(5)11g。待溶解后分裝試管,121℃高壓滅菌15min。


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